免疫亲和磁珠-白醋黄曲霉毒素-光化学衍生/HPLC应用
免疫亲和磁珠-白醋黄曲霉毒素-光化学衍生/HPLC应用
1.前言
本方法采样免疫亲和磁珠净化结合柱后光化学衍生-HPLC方法检测了白米醋中的4种黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。样品提取后经过免疫亲和磁珠净化，进入HPLC系统进行分离，定量。四种黄曲霉毒素1ppb和200ppb的加标回收率均大于100%，CV小于10%。实验证明，该方法可有效、准确的用于白米醋等样品中黄曲霉毒素的测定。
2.样本前处理方法
称取5g待测样品，加入20mL提取液，涡旋提取20min，然后7000r离心5min。取1mL上清液进入样品孔，将黄曲霉毒素净化试剂预装板条（Cat.71101）放入海狸全自动净化仪，运行程序。程序运行结束后收集洗脱液，过0.22μm滤膜，待测。
3.实验条件
HPLC方法（光化学柱后衍生） | |
色谱柱 | C18 柱（柱长 150 mm 或 250 mm，柱内径 4.6 mm，填料粒径 5 μm），或性能相当色谱柱 |
荧光检测波长 | 激发波长 360 nm；发射波长 440 nm。 |
流动相A | 甲醇-乙腈（体积比，50:50） |
流动相B | 水 |
等度洗脱 | A:B = 35:65 |
流速 | 1.0 mL/min |
柱温 | 40 ℃ |
进样量 | 20 μL |
4.样品分析
分别配制四种黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2的混合标准溶液1ppb和200ppb，按照上述HPLC方法分析1ppb加标回收率为105.7%，200ppb加标回收率为121.95%。
样品名称 | 样品质量/g | 加标 | 提取液 | 回收率 |
白米醋 | 5.09 | 200ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 122.20% |
白米醋 | 5.07 | 200ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 121.70% |
白米醋 | 5.00 | 1ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 109.00% |
白米醋 | 5.00 | 1ppb | 20mL 70% 甲醇水 | 102.40% |
图1 白米醋样品（1ppb）色谱图（上）和黄曲霉毒素标准谱图（下）分别是黄曲霉毒素G2，G1，B2，B1
5.结论
本方法采样免疫亲和磁珠净化结合柱后光化学衍生-HPLC方法检出了白米醋中的4种黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。在保证四种黄曲霉毒素的分离度的前提下，将净化时间缩短至1小时左右，效果明显。实验证明该方法可用于实际样品中黄曲霉毒素的准确测定。
